杭州磁珠法 工作稳定性佳 呈良好的线性关系

带病变基因突变位点的游离DNA 片段以及母血中的少量来源于胎儿的游离循环DNA 片段。这类DNA 片段在疾病的早期诊断、预后、监测等方面具有重要潜在价值。这就体现出了游离DNA提取试剂盒的价值。
游离DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、取200ul样品加入400μl Buffer ML及300μl异丙醇，漩涡震荡样品管以充分混匀。
2、充分混合震荡磁珠，使管内磁珠完全均匀悬浮起来，取40ul 磁珠加入样品管中，漩涡震荡该管30s使磁珠均匀悬浮于样品管中。1000-2000转离心1-2s收集管盖上的液体。
3、样品管室温放置10分钟。
注:放置期间如出现磁珠沉降现象应及时颠倒或是漩涡混匀，以保证磁珠对DNA的结合效率。
4、将样品管置于磁力架上1分钟左右或待磁珠被磁力架装置完全吸附，保持样品管在磁力架上静止，用移液吸取上清并弃掉，操作过程中避免触碰到磁珠团。
5、将装有磁珠的离心管移开磁力架，并确保其中的上清液全部移除。向管中加入600μl的Buffer W1，每秒1-2次的速度上下颠倒混匀直到磁珠分散开，无大的团块。1000-2000转离心 1-2s收集管盖上的液体。
6、将样品管置于磁力架上1分钟左右或待磁珠被磁力架装置完全吸附，保持样品管在磁力架上静止，用移液吸取上清并弃掉，操作过程中避免触碰到磁珠团。
7、将装有磁珠的离心管移开磁力架并确保其中的上清液全部移除，向管内加入600ulBuffer W2每秒1-3次的速度上下颠倒混匀直到磁珠分散开，无大的团块。1000-2000转离心 1-2s收集管盖上的液体。
8、将样品管置于磁力架上1分钟左右或待磁珠被磁力架完全吸附，保持样品管在磁力架上静止，用移液吸取上清并弃掉，操作过程中避免触碰到磁珠团。
9、重复步骤7-8一次，将管内的液体全部吸除干净，并将样品管从磁力架上取出。
10、将样品管于室温放置分钟，使残留Z醇充分挥发。
注：避免真空抽干，磁珠过于干燥将会降低DNA洗脱效率。
11、向管内加入20-100ul Elution Buffer并用移液轻轻吹打5-10次使磁珠充分重悬，操作过程中应避免产生气泡。
12、室温放置1-5分钟以充分洗脱。
注：为了达到产量请在放置期间定时混匀磁珠。
13、将洗脱样品管放回磁力架上1分钟或待所有磁珠都被磁力架装置完全吸附。
14、小心的将洗脱上清转移到新的灭过菌的管子中，在转移过程不要碰到磁珠，如出现磁珠悬起现象请重复步骤13-14。

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游离DNA又称循环DNA(circulating nucleic acid)，是指循环血中游离于细胞外的内源性DNA，可以单链或双链DNA的形式存在，大多数游离DNA是以白形式存在的双链DNA。游离DN段较小，长度一般在几十到几百个bp之间。近些年的研究发现，人循环血中游离DNA含有非常重要的遗传信息，利用游离DNA高通量测序技术可以有效的进行疾病的相关检测，使用游离DNA高通量测序技术，不仅准确率更高，而且仅需采集静脉血就可以直接进行检测，实现了无创性筛查，意义重大。

游离DNA提取试剂盒采用磁珠纯化技术和特别的缓冲液系统，为从血清或血浆中提取游离循环DNA（free-circulating/cell-free DNA）提供了一种简单、快速、效率的方法。提取过程不涉及酚等试剂，提取的基因组DNA的片段大、纯度高、质量稳定可靠。提取得到DNA的片段既可直接用于PCR扩增，qPCR测定，二代测序（NGS）等下游实验操作，也可置于-20℃储存备用。该试剂盒也可有效的与液体工作站和磁棒法磁珠自动提取系统配套使用，以进行快速、大样本量的提取。

游离DNA提取试剂盒使用特别提取配方，优化了小片段游离核酸提取效率，尤其适用于患者外周血游离DNA（ctDNA）检测，良好满足人类早期遗传病筛查以及用药参考的需求。试剂盒可适用于大体积样本；可洗脱体积低至30μl，能有效富集样本DNA，适用于后续QPCR、ddPCR和高通量测序等不同分析平台。游离DNA提取试剂盒能效率较高的提取，有效获得游离DNA；高纯度提取，有效去除蛋白和其它影响下游操作和分析的污染物；兼容磁力架手工操作与多种自动化设备。适用范围：血清或血浆样本。

游离DNA提取试剂盒利用游离DNA进行的产前筛查或检测，要进行游离DNA的提取纯化，这一 步是较重要，也是基本的步骤，提取产物的质量直接影响到后续检测结果的准确性和可靠性。由于游离DN段较小，在血浆中含量低，因此，游离DNA的提取试剂与普通的核酸提取试剂相比，需要有更高的提取效率，如果要满足大规模的筛查检测需要，游离DNA提取试剂盒还需要满足操作简单、成本低、能够实现自动化等要求。
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