所用样品应为新鲜血浆或是血清样品,-80℃的冻存样品也适用但不能反复冻融。游离DNA提取试剂盒可有效结合血浆及血清中浓度低至50pg/ml 的游离DNA的片段,由于该试剂盒洗脱体积可低至20μl,这一特性使试剂盒具有浓缩提取低浓度游离DNA 片段的作用。
游离DNA提取试剂盒利用游离DNA进行的产前筛查或检测,要进行游离DNA的提取纯化,这一 步是较重要,也是基本的步骤,提取产物的质量直接影响到后续检测结果的准确性和可靠性。由于游离DN段较小,在血浆中含量低,因此,游离DNA的提取试剂与普通的核酸提取试剂相比,需要有更高的提取效率,如果要满足大规模的筛查检测需要,游离DNA提取试剂盒还需要满足操作简单、成本低、能够实现自动化等要求。
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游离DNA(Cell-Free Circulating DNA,cf-DNA),是一种在细胞外呈现游离状态且无细胞状态的DNA,广泛存在于动植物及人类的血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液或粪便当中。患者的血浆和血清中检测到了基因突变,并且与原发基因相一致,因此游离DNA逐渐受到重视。游离DNA已被是一种对于和胎儿以外的众多疾病的有用的生物标志物,包括创伤、败血症、无菌性、心肌梗塞、中风、移植、糖尿病和镰状细胞病等。游离DNA提取试剂盒能有效提取游离DNA,协助研究与诊断。
游离DNA提取试剂盒适用样本类型广,包括血清、血浆、胸腹水、脑脊液、尿液、水样等大部分的生物液体样本。其中,血清、血浆、腹水的提取量为0.3-1.5ml,尿液的提取量为2-10ml,水样的提取量为5-18ml。游离DNA提取试剂盒有效克服了一般试剂盒样本量大、洗脱液多、DNA提取终浓度依然较低的缺点。试剂盒提取体系经多次优化,提取DNA纯度高,可广泛用于各种PCR、荧光定量PCR、测序和分子杂交等。
游离DNA提取试剂盒采用磁珠纯化技术和特别的缓冲液系统,为从血清或血浆中提取游离循环DNA(free-circulating/cell-free DNA)提供了一种简单、快速、效率的方法。提取过程不涉及酚等试剂,提取的基因组DNA的片段大、纯度高、质量稳定可靠。提取得到DNA的片段既可直接用于PCR扩增,qPCR测定,二代测序(NGS)等下游实验操作,也可置于-20℃储存备用。该试剂盒也可有效的与液体工作站和磁棒法磁珠自动提取系统配套使用,以进行快速、大样本量的提取。
目前用于血浆游离DNA提取纯化的方法主要有酚氯仿法、柱提取法和磁珠法,其中 酚氯仿法需要在核酸提取过程中使用对人体有害的溶剂,越来越难以被检验人员接受,而且该方法操作复杂,对于游离DNA来说提取效率较低,需要加大样本量来满足后续检测需求,同时在提取过程中需要进行高速离心操作,难以实现自动化。柱提取法是目前主要 使用的方法,该方法不需要使用毒性较大的溶剂,操作方法较酚氯仿法稍简单,但操作过程中仍然需要进行高速离心,同时提取效率较低,需要加大样本量来满足后续检测的需求,难以实现自动化。游离DNA提取试剂盒的磁珠法近几年才开始应用于DNA的提取,该方法的特点是提取过程不需要进行高速离心,容易实现自动化。
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