青岛磁珠法 灵敏度较高 质量稳定可靠

血液中游离DNA 又称游离循环核酸（Circulating Cell Free nucleic acid），是指循环血液中游离于细胞外的部分，降解的机体内源性DNA。这类DNA 片段大小通常小于1000bp，主要存在于血清及血浆中。游离DNA提取试剂盒能提取这类DNA 片段。
游离DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、取200ul样品加入400μl Buffer ML及300μl异丙醇，漩涡震荡样品管以充分混匀。
2、充分混合震荡磁珠，使管内磁珠完全均匀悬浮起来，取40ul 磁珠加入样品管中，漩涡震荡该管30s使磁珠均匀悬浮于样品管中。1000-2000转离心1-2s收集管盖上的液体。
3、样品管室温放置10分钟。
注:放置期间如出现磁珠沉降现象应及时颠倒或是漩涡混匀，以保证磁珠对DNA的结合效率。
4、将样品管置于磁力架上1分钟左右或待磁珠被磁力架装置完全吸附，保持样品管在磁力架上静止，用移液吸取上清并弃掉，操作过程中避免触碰到磁珠团。
5、将装有磁珠的离心管移开磁力架，并确保其中的上清液全部移除。向管中加入600μl的Buffer W1，每秒1-2次的速度上下颠倒混匀直到磁珠分散开，无大的团块。1000-2000转离心 1-2s收集管盖上的液体。
6、将样品管置于磁力架上1分钟左右或待磁珠被磁力架装置完全吸附，保持样品管在磁力架上静止，用移液吸取上清并弃掉，操作过程中避免触碰到磁珠团。
7、将装有磁珠的离心管移开磁力架并确保其中的上清液全部移除，向管内加入600ulBuffer W2每秒1-3次的速度上下颠倒混匀直到磁珠分散开，无大的团块。1000-2000转离心 1-2s收集管盖上的液体。
8、将样品管置于磁力架上1分钟左右或待磁珠被磁力架完全吸附，保持样品管在磁力架上静止，用移液吸取上清并弃掉，操作过程中避免触碰到磁珠团。
9、重复步骤7-8一次，将管内的液体全部吸除干净，并将样品管从磁力架上取出。
10、将样品管于室温放置分钟，使残留Z醇充分挥发。
注：避免真空抽干，磁珠过于干燥将会降低DNA洗脱效率。
11、向管内加入20-100ul Elution Buffer并用移液轻轻吹打5-10次使磁珠充分重悬，操作过程中应避免产生气泡。
12、室温放置1-5分钟以充分洗脱。
注：为了达到产量请在放置期间定时混匀磁珠。
13、将洗脱样品管放回磁力架上1分钟或待所有磁珠都被磁力架装置完全吸附。
14、小心的将洗脱上清转移到新的灭过菌的管子中，在转移过程不要碰到磁珠，如出现磁珠悬起现象请重复步骤13-14。

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游离DNA提取试剂盒储存条件及稳定性：
试剂盒内的磁珠请置于4°C保存，其它组分室温保存即可，如果出现结晶析出现象，需将结晶溶解后使用。在适合的储存条件下该试剂盒未开封使用有效期为1年，开封使用后请于3个月内使用以保证较好地实验效果。
磁珠特性：
适用样品类型：血清及血浆；
表面功能团：羟基；
磁珠浓度：50mg/ml；
磁珠保存液成分：ddH2O；
洗脱体积：20-100ul (可根据客户需要适量增加或是减少)。

游离DNA提取试剂盒适用样本类型广，包括血清、血浆、胸腹水、脑脊液、尿液、水样等大部分的生物液体样本。其中，血清、血浆、腹水的提取量为0.3-1.5ml，尿液的提取量为2-10ml，水样的提取量为5-18ml。游离DNA提取试剂盒有效克服了一般试剂盒样本量大、洗脱液多、DNA提取终浓度依然较低的缺点。试剂盒提取体系经多次优化，提取DNA纯度高，可广泛用于各种PCR、荧光定量PCR、测序和分子杂交等。

游离DNA又称循环DNA(circulating nucleic acid)，是指循环血中游离于细胞外的内源性DNA，可以单链或双链DNA的形式存在，大多数游离DNA是以白形式存在的双链DNA。游离DN段较小，长度一般在几十到几百个bp之间。近些年的研究发现，人循环血中游离DNA含有非常重要的遗传信息，利用游离DNA高通量测序技术可以有效的进行疾病的相关检测，使用游离DNA高通量测序技术，不仅准确率更高，而且仅需采集静脉血就可以直接进行检测，实现了无创性筛查，意义重大。

游离DNA（free circulating/cell-free DNA，cfD-NA）是一种无细胞状态的、片段化的胞外DNA，主要存在于血液、滑膜液和脑脊液等体液中。目前游离DNA提取在无创产前检测和的液态活检方面应用较广。除此之外，游离DNA在移植、脑卒中、自身*病和心肌梗死等疾病上的应用价值也日益清晰。目前，对游离DNA提取提取质量缺乏统一的评价标准。游离DNA提取在血浆内的含量低，大致范围在15~40ng/m，在如此低丰度的情况下，采用紫外波长等传统方法得到的定量结果往往不准确。而游离DNA提取试剂盒的效率较高。
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