血清或是血浆中的游离循环DNA 的浓度因个体而异且浓度很低常在1-100ng/ml范围内。游离DNA提取试剂盒提取得到DNA的片段既可直接用PCR 扩增、qPCR 测定、二代测序(NGS)等下游分子操作,也可置于-20℃储存备用。
游离DNA提取试剂盒利用游离DNA进行的产前筛查或检测,要进行游离DNA的提取纯化,这一 步是较重要,也是基本的步骤,提取产物的质量直接影响到后续检测结果的准确性和可靠性。由于游离DN段较小,在血浆中含量低,因此,游离DNA的提取试剂与普通的核酸提取试剂相比,需要有更高的提取效率,如果要满足大规模的筛查检测需要,游离DNA提取试剂盒还需要满足操作简单、成本低、能够实现自动化等要求。
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游离DNA提取试剂盒使用特别提取配方,优化了小片段游离核酸提取效率,尤其适用于患者外周血游离DNA(ctDNA)检测,良好满足人类早期遗传病筛查以及用药参考的需求。试剂盒可适用于大体积样本;可洗脱体积低至30μl,能有效富集样本DNA,适用于后续QPCR、ddPCR和高通量测序等不同分析平台。游离DNA提取试剂盒能效率较高的提取,有效获得游离DNA;高纯度提取,有效去除蛋白和其它影响下游操作和分析的污染物;兼容磁力架手工操作与多种自动化设备。适用范围:血清或血浆样本。
游离DNA正在成为检测、诊断和监测的重要分析物。因为获得相对容易及无创性特点,游离DNA作为“液体组织”已经显示出了非常重要的应用前景。目前,妨碍游离DNA成为一种强大的分析物的主要因素之一就是提取物缺乏标准化和适当的质量控制。近,在影响分析效果的样品前处理和储存等方面取得了进展,但提取方法和定量方法仍然是实验误差的主要来源。
游离DNA提取试剂盒适用样本类型广,包括血清、血浆、胸腹水、脑脊液、尿液、水样等大部分的生物液体样本。其中,血清、血浆、腹水的提取量为0.3-1.5ml,尿液的提取量为2-10ml,水样的提取量为5-18ml。游离DNA提取试剂盒有效克服了一般试剂盒样本量大、洗脱液多、DNA提取终浓度依然较低的缺点。试剂盒提取体系经多次优化,提取DNA纯度高,可广泛用于各种PCR、荧光定量PCR、测序和分子杂交等。
目前用于血浆游离DNA提取纯化的方法主要有酚氯仿法、柱提取法和磁珠法,其中 酚氯仿法需要在核酸提取过程中使用对人体有害的溶剂,越来越难以被检验人员接受,而且该方法操作复杂,对于游离DNA来说提取效率较低,需要加大样本量来满足后续检测需求,同时在提取过程中需要进行高速离心操作,难以实现自动化。柱提取法是目前主要 使用的方法,该方法不需要使用毒性较大的溶剂,操作方法较酚氯仿法稍简单,但操作过程中仍然需要进行高速离心,同时提取效率较低,需要加大样本量来满足后续检测的需求,难以实现自动化。游离DNA提取试剂盒的磁珠法近几年才开始应用于DNA的提取,该方法的特点是提取过程不需要进行高速离心,容易实现自动化。
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