上海病原DNA提取试剂盒 提取灵敏度高 广泛兼容生物液体样本

体液病原DNA提取试剂盒（磁珠法）适用于多种生物体液样本（如肺泡灌洗液、痰液、脑脊液等）及拭子样本的微生物DNA提取，可兼容上游经过去宿主核酸流程的样本。
体液病原DNA提取试剂盒用于从各种液体样品中提取DNA的试剂盒。可以处理各种液体样品（血液，血清，血浆，脑脊液，淋巴液，细胞培养上清液等）、单个或少量的细胞等。提取的DNA与PCR、荧光PCR、RT-PCR、荧光RT-PCR等后续反应兼容。
试剂盒特点：
1．DNA的回收率高。
2．一管式操作，减少了样品污染的可能。
3．一站式套装，降低了实验误差。
4．安全无毒，不需要使用一些溶液。
5．试剂稳定，可以长期放置。

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体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、取1.5ml离心管(自备)，加入20ul的Proteinase K溶液。
2、向离心管中加入200 ul血清或血浆，然后再加入200 ul BufferGB，涡旋震荡15 sec。
3、56°C孵育15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
4、加入250ul无水乙醇，涡旋震荡15sec，室温放置5 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
5、将一个Spin Columns CG“放入Collection Tubes(2 m1) 中，将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中，10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中的废液。
6、向吸附柱内加入500ul 的Buffer GD，室温10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。
7、向吸附柱内加入500ul的Buffer PW，室温10000rpm 离心30 sec，弃收集管中废液。
8、向吸附柱中加入500ul 无水乙醇，10000 rpm离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、室温12000rpm离心3min，甩干残留液体。
10、将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置3 min,使吸附膜完全变干。加入30~ 100ul的洗脱液，室温放置2~ 5 min。12000 rpm离心1min，离心管底溶液即DNA。

体液中病原dna的提取步骤中，去污剂用于破坏细胞或病毒蛋白外壳或膜结构，使核酸游离到溶液中，胍盐或盐用于变性蛋白质，释放其结合的核酸并促进核酸与硅基质膜或磁珠结合，同时也具有裂解病毒外壳或膜结构的功能，如果使用溶剂，也可以破坏细胞结构，变性蛋白质进而释放核酸。
体液病原DNA提取试剂盒保存条件：常温运输和保存，长期放置时（1月以上）应该放4℃。且具有挥发性，使用后需要将瓶盖拧紧。

体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、200μl血清等体液（需回复到室温，不足可用0.9%NaCl或者PBS补足）转入上述1.5ml离心管，加入400μl裂解液DLB，立刻涡旋振荡充分混匀。
2、室温(15-25℃)放置10分钟，每隔5分钟，振荡混匀一次。
3、加入450μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境**25℃，乙醇需要冰上预冷后再加入。
4、将上述混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。如果总体积**过750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中。
5、加500μl去蛋白液RE，12000rpm离心30秒，弃废液。
6、加入500μl漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃废液，加入500μl漂洗液WB，重复一遍。
7、将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8、取出吸附柱AC，放入一个新的离心管中，在吸附膜的中间部位加30-50μl洗脱缓冲液EB（事先在65－70℃水浴中加热效果更好），室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要的DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是至小体积不应少于20μl，体积过小降低洗脱效率，减少DNA产量。
9、DNA可以存放在2-8℃，如果要较长时间存放，可以放置在－20℃。

体液病原DNA提取试剂盒结合在硅基质膜或磁珠表面的DNA，经含醇的盐溶液漂洗可进一步去除细胞残片、非特异吸附的蛋白质和过浓的盐离子，再经纯水等洗脱液即可将纯度较高的DNA洗脱下来，进而应用于下游实验中（如pcr、酶切、连接、测序等）；通过酚仿释放至溶液中的核酸，可通过调节酸碱度后加入高浓度醇溶液沉淀出来，再经醇溶液洗涤晾干后即可获得高纯度DNA。
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